Диагностикум геморрагической лихорадки с почечным синдромом

Инструкция

по применению диагностикума геморрагической

лихорадки с почечным синдромом культурального, поливалентного

для непрямого метода иммунофлуоресценции

Диагностикум геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС)  для  непрямого  метода  иммунофлуоресценции  (НИФ),  предназначен  для  выявления  специфических  антител  в  сыворотках  крови  людей,  а  также  в  сыворотках  крови  диких  и  лабораторных  животных.

Выпускается в виде набора, который включает следующие компоненты:

антигенный  препарат  (АГ+)  – предметное стекло, на поверхность которого нанесен  хантавирусный антиген, инактивированный. АГ+ имеет  вид  серых  пятен  высушенной  суспензии  антигенсодержащих  клеток  диаметром  2-3 мм, по 7 пятен в ряду по длине предметного стекла  и  по 3  пятна в ряду по ширине предметного стекла; стекла обернуты в фольгу алюминиевую; положительный  контрольный  образец  анти-Хантаан  (К1+),  сухой  –  сыворотка  крови  реконвалесцента  после  ГЛПС,  содержащая  антитела  к  хантавирусам  серотипов  Хантаан,  Добрава/Белград,  Сеул,  инактивированная,  лиофилизированная;  пористая масса желтовато-белого цвета;

Взамен Инструкции по применению, утвержденной 19 мая 1999 года

положительный  контрольный  образец  анти-Пуумала  (К2+),  сухой  –  сыворотка  крови  реконвалесцента  после  ГЛПС,  содержащая  антитела  к  хантавирусу  серотипа  Пуумала, инактивированная, лиофилизированная; пористая масса желтовато-белого цвета; отрицательный  контрольный  образец  (К-),  сухой Ї сыворотка крови  человека,  не  содержащая  антител  к  хантавирусам,  инактивированная, лиофилизированная; пористая масса желтовато-белого цвета; ФИТЦ – коньюгат,  сухой Ї  антитела  против  иммуноглобулинов  человека  меченные  флюоресцеинизотиоцианатом  (ФИТЦ),  содержит  в  качестве  контрастера  Эванс-голубой  (1:50 000);  пористая масса серо-голубого цвета; вода очищенная для разведения реагентов; прозрачная

бесцветная жидкость.

Набор рассчитан на исследование 210 образцов, включая контрольные.

Назначение.  Выявление  специфических  антител  к  хантавирусам  в сыворотках  крови  людей,  а  также  в  сыворотках  крови  диких  и  лабораторных животных, для использования in vitro.

Способ применения

Проведение реакции НИФ

Приготовление растворов и реагентов для НИФ.

Фосфатно-солевой  буфер  (ФСБ)  –  раствор  для  титрования  контрольных сывороток: в колбу ёмкостью 1 л вносят 8,7 г натрия хлорида  (NaCl),  1,8 г  натрия  фосфорнокислого  двузамещенного  2-х  водного  (Na2HPO4 х 2Н2О),  1,25  г  натрия  фосфорнокислого  однозамещенного  безводного  (Na2HPO4);  растворяют  в  воде,  доводят общий объём до 1 л. Устанавливают рН 7,4 с помощью 1N раствора натрия гидроокиси (NaOH). Хранение: 7 сут при 2-8 0С Физиологический  раствор  (ФР) – 0,9%  раствор  хлорида  натрия  для отмывки  стекол  с  препаратами:  в  колбу  емкостью  1  л  вносят  9  г натрия  хлорида  (NaCl),  растворяют  в  воде  и  доводят  общий  объем до 1 л.

Хранение: до 14 суток при 2-8 0С.

Контрольные образцы  К1+  и  К2+  и  К-  растворяют  в  0,2  мл  воды  и разводят  на  ФСБ  или  ФС до рабочего разведения, указанного на флаконе. ФИТЦ-конъюгат  растворяют  в  0,25  мл  воды  и  доводят  ФСБ  или ФС до рабочего разведения, указанного на флаконе.

Хранение:  растворенные  сыворотки  и  коньюгаты  хранят  при  температуре 2-8 0С в течение 1 недели.

Перед  использованием  стекла  с  антигенным  препаратом,  хранившиеся  при  температуре  не  выше  минус  20 0С,  подсушивают  при комнатной  температуре  (16-24 0С),  промывают  дистиллированной  водой и высушивают в тех же условиях.

Во  вспомогательном  ряду  пробирок  или  лунок  пластиковых  панелей  на  ФСБ  готовят  двукратные  разведения  исследуемых  сывороток  крови  людей  и,  начиная  с  разведения  1:16,  наносят по одной капле  (5 мкл)  на  отдельное  «пятно».  На  каждое  стекло  наносят  также 3 контрольные  сыворотки  в  рабочих  разведениях.  Препараты  с нанесенными исследуемыми и контрольными образцами помещают во влажную  камеру  и  инкубируют  при  37 0С  в  течение  30  мин  или при 2-8 0С  в  течение 18 ч  после  окончания  инкубации  препараты  3-кратно по 3  мин  выдерживают  в  физиологическом  растворе,  промывают  в течение 1 мин  дистиллированной водой и высушивают при комнатной температуре. На каждое «пятно» наносят ФИТЦ-коньюгат в рабочем разведении  по  1  капле  (5 мкл).  Препараты  инкубируют  во  влажной камере  при  температуре  37 0С  в  течение  30  мин,  после  чего 3-кратно по  5  мин  выдерживают  в  физиологическом  растворе,  промывают  в

течение 1 мин дистиллированной водой и высушивают при комнатной температуре.

Учет результатов.

  Препараты исследуют с помощью люминесцентного микроскопа ЛЮМАМ-2  или  другой  марки  под  водно-иммерсионным  объективом (х40  или  х60).  Для  хантавирусов  характерна  локализация специфического  антигена  с  четкой  гранулярной  структурой  в цитоплазме клеток. Яркое изумрудно-зеленое зернистое свечение цитоплазмы  клеток,  содержащих  антиген  хантавируса,  просматривается на фоне от серо-бурого до темно-коричневого или кирпично-красного окрашивания структуры неинфицированных клеток.

Интенсивность специфического сведения антиген содержащих клеток оценивают по условной 4-х крестовой шкале:

++++ (4 креста) – интенсивная яркая изумрудно-зеленая флюоресценция;

+++ (3 креста) – яркая зеленая флюоресценция;

++ (2 креста) – отчетливое зеленое свечение;

+ (1 крест) – тусклое зелено-серое сведение;

0 – свечение отсутствует.

Реакцию учитывают при отсутствии специфического свечения с К-.

Положительной  считают  пробу  (разведение)  с  интенсивностью  свечения 2 (++) креста.

  Оптимальные сроки забора и обследования сывороток крови для определения  4-кратного  и  более  нарастания  титра  специфических антител:

1-я сыворотка – при поступлении больного в стационар или  при обращении  в  поликлинику; 2-я – через 3-4 дня после взятия 1-ой сыворотки.  В  случае  отсутствия  нарастания  титра  антител  в  парных

сыворотках,  следует  произвести  забор 3-й сыворотки через 7-10 дней после взятия второй сыворотки.

Форма выпуска:  выпускается в наборе из 6 компонентов:

АГ+                                        – 10 предметных стекол. К1+                                        – 1 ампула (0,2 мл) К2+                                        – 1 ампула (0,2 мл) К —                                        – 1 амплуа (0,2 мл) Вода                                        – 1 ампула (1,0 мл) ФИТЦ-коньюгат                        – 1 флакон (0,25 мл) Инструкция по применению        – 1 шт.

Срок годности – 2 года.

Диагностикум ГЛПС с истекшим сроком годности применению не подлежит

Условия отпуска. Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических учреждений.

Транспортирование:  в  соответствии  с  СП 3.3.2.1248-03  при  температуре  от  2  до  8 0С.  Допускается  транспортирование  при температуре до 20 0С в течение не более 2-х сут.

Хранение:  К1+,  К2+,  К-,  ФИТЦ-коньюгат  в  соответствии  с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 0С. Препарат подлежит разукомплектации при получении: предметнее стекла с АГ+ хранят при температуре не выше минус 20 0С. Препарат хранить в недоступном для детей месте.

Регистрационные номер …………….        Дата регистрации ………………..

  Рекламации на качество диагностикума геморрагической лихорадки с почечным  синдромом  культурального, поливалентного для непрямого метода  иммунофлуоресценции  направлять  в  ФГУН  ГИСК  им.  Л. А.  Тарасевича  Роспотребнадзора  (119 002,  г.  Москва,  ул.  Сивцев

Вражек, 41, телефон (095) 241-39-22) и в ФГУП «ПИПВЭ им. » РАМН 9142782, Московская область, Ленинский район, п/о Институт полиомиелита, тел/