Методы диагностики при хромосомных синдромах
Для подтверждения (или установления) диагноза хромосомной болезни используют цитогенетические методы. Наибольшее значение имеют:
1. Метод кариотипирования.
2. Метод определения полового хроматина.
Метод кариотипирования.
Позволяет изучить кариотип в целом (т.е. число и структуру хромосом). Кариотип изучают в делящихся клетках на стадии метафазы митоза, т.к. в этой стадии хромосомы максимально спирализованы и хорошо видны в световой микроскоп. Препарат метафазных хромосом называется метафазной пластинкой. Для диагностики большинства хромосомных болезней метафазные пластинки изготавливают из лимфоцитов периферической крови. Пригодны также фибробласты кожи, клетки красного костного мозга. Для пренатальной диагностики культивируют клетки амниотической жидкости, ворсин хориона, плаценты, эмбриональные ткани.
Рассмотрим получение метафазной пластинки из лимфоцитов периферической крови.
Для кариотипирования используют венозную кровь (I-2 мл) или из пальца. Кровь помещают в специальную питательную среду (Среда 199 «Игла» и др.) с фитогемагглютинином /ФГА/. ФГА получают из бобовых растений, он вызывает иммунологическую трансформацию лейкоцитов иих деление. Культуру помещают в термостат на 48-72 часа.
За 2-3 часа до конца культивирования добавляют колхицин (или колцемид). Колхицин получают из растения безвременника весеннего. Он разрушает веретено деления и останавливает деление клетки на стадии метафазы. Следующий этап изготовления препарата—обработка клеток гипотоническим раствором хлорида калияили нитрата натрия. В гипотоническом растворе клетки набухают, межхромосомные связи рвутся и хромосомы свободно плавают в цитоплазме. Клеточную суспензию фиксируют и наносят на предметное стекло. Привысыхании фиксатора клетки и хромосомы прочно прикрепляются к стеклу. Препарат окрашивают чаще всего по Романовскому-Гимзе. Такая окраска называется простойили рутинной. Все хромосомы окрашиваются равномерно по всей длине. Рутинная окраска позволяет подсчитать число хромосом, распределитьих по группам и обнаружить грубые хромосомные аберрации.
Для тонкойдиагностики хромосомных аберраций с середины 70-х годов используют метод «дифференциальной окраски хромосом».
Наиболее широко используют G-окраску. Хромосомы перед окраской по Романовскому-Гимзе предварительно обрабатывают протеазами (трипсином). Хромосомы после окраски становятся полосатыми. Чередованиетемных и светлых полос индивидуально в каждой паре хромосом. Предполагают,что темные полосы — гетерохроматиновыеучастки,а светлые — эухроматиновые.
Определение полового хроматина. Половой хроматин — это спирализованная Х-хромосома. Одна из Х-хромосом у женщин инактивируется на 16-19 сутки эмбрионального развития, а вторая остаетсяактивной. Спирализованная Х-хромосома обнаруживается в ядрахсоматическихклеток в виде темной, хорошо окрашивающейся глыбки.
Методика определения полового хроматина в буккальном соскобе следующая. После предварительного полоскания ротовой полости стоматологическим шпателем берут соскоб эпителия внутренней поверхности щеки у коренных зубов. Соскоб наносится равномерным слоем на предметное стекло, окрашивается в течение 2 минут ацетоарсеином, затем покрывается покровным стеклом. Излишки краски удаляют с помощью фильтровальной бумаги. Подсчет телец полового хроматина проводят под иммерсией в круглых или овальных ядрах с ненарушенной ядерной мембраной. В норме у женщин обнаруживают половой хроматин в более 20% клеток, а у мужчин он в норме отсутствует.
Метод используют для диагностики хромосомных болезней, связанных с изменением числа Х-хромосом.
Существует также методика определения У-хроматина, которая используется для диагностики синдрома полисомии У.
Источник
/О беременности/Беременность/Наблюдение беременности. Здоровье
- Зачем нужна пренатальная диагностика?
- Биохимические скрининги — «двойной» и «тройной» тесты
- Двойной тест
- Тройной тест
- Как рассчитывают риски хромосомных аномалий?
- Какая степень риска хромосомных аномалий считается высокой?
- Точность биохимического скрининга беременных
- Генетические анализы при подозрении наличия хромосомных аномалий
- Инвазивные методы исследования (биопсия хориона, амниоцентез, кордоцентез)
- Неинвазивные методы исследования
- Решение всегда за родителями!
Сложный этический вопрос, стоит ли проводить обследование для выявления генетических патологий будущего малыша, каждая беременная решает для себя сама. В любом случае, важно обладать всей информацией о современных возможностях диагностики.
О том, какие сегодня существуют инвазивные и неинвазивные методы пренатальной диагностики, насколько они информативны и безопасны и в каких случаях применяются, рассказала Юлия ШАТОХА, кандидат медицинских наук, заведующая отделением пренатальной ультразвуковой диагностики Сети медицинских центров «УЗИ студия».
Зачем нужна пренатальная диагностика?
Предсказать возможные генетические патологии на протяжении беременности помогают различные методы. Прежде всего, это ультразвуковое исследование (скрининг), с помощью которого врач может заметить отклонения в развитии плода.
Второй этап пренатального скрининга при беременности – биохимический скрининг (анализ крови). Эти анализы, также известные как «двойной» и «тройной» тесты, сегодня проходит каждая беременная. Он позволяет с некоторой степенью точности спрогнозировать риск существования хромосомных аномалий плода.
” Точный диагноз на основании такого анализа поставить невозможно, для этого требуются хромосомные исследования – более сложные и дорогостоящие.
Хромосомные исследования не обязательны для всех беременных, однако существуют и определенные показания:
будущие родители – близкие родственники;
будущая мать старше 35 лет;
наличие в семье детей с хромосомной патологией;
выкидыши или замершие беременности в прошлом;
потенциально опасные для плода заболевания, перенесенные во время беременности;
прием медикаментов, не рекомендованных при беременности;
незадолго до зачатия кто-то из родителей подвергался ионизирующему излучению (рентген, лучевая терапия);
риски, выявленные в результате УЗИ.
Мнение специалиста
Статистическая вероятность рождения ребенка с хромосомным нарушением — от 0,4 до 0,7%. Но нужно учитывать, что это риск в популяции в целом, для отдельных беременных он может быть чрезвычайно высок: базовый риск зависит от возраста, национальности и различных социальных параметров. Например, риск хромосомных аномалий у здоровой беременной с возрастом увеличивается. Кроме того есть, а есть индивидуальный риск, который определяется на основании данных биохимического и ультразвукового исследований.
«Двойной» и «тройной» тесты
Биохимические скрининги также известные как «двойной» и «тройной» тесты, а в просторечье именуемые и вовсе «анализ на синдром Дауна» или «анализ на уродства», проводят в строго определённые сроки беременности.
Двойной тест
Двойной тест делают на 10-13 неделе беременности. В ходе этого исследования крови смотрят величину таких показателей как:
свободный ХГЧ (хорионический гонадотропин),
РАРРА (плазменный протеин А, ингибитор А).
Анализ следует делать только после проведения УЗИ, данные которого также используют при расчете рисков.
Специалисту потребуются следующие данные из заключения УЗИ: дата проведения УЗИ, копчико-теменной размер (КТР), бипариетальный размер (БПР), толщина воротникового пространства (ТВП).
Тройной тест
Второй — «тройной» (либо «четверной») тест беременным рекомендуют проходить на 16-18 неделе.
В ходе этого теста исследуют количество следующих показателей:
ХГЧ;
альфа-фетопротеин (АФП);
свободный эстриол;
ингибин А (в случае четверного теста)
На основании анализа данных первого и второго биохимического скрининга и УЗИ, врачи рассчитывают вероятность таких хромосомных аномалий как:
синдром Дауна;
синдром Эдвардса;
дефекты нервной трубки;
синдром Патау;
синдром Тернера;
сндром Корнелии де Ланге;
синдром Смита Лемли Опитца;
триплоидия.
Мнение специалиста
Двойной или тройной тест это биохимические анализы, определяющие концентрацию в крови матери определенных веществ, характеризующих состояние плода.
Как рассчитывают риски хромосомных аномалий?
На результаты биохимического скрининга, помимо возможных хромосомных патологий, влияют очень многие факторы, в особенности возраст и вес. Чтобы определить статистически достоверные результаты, была создана база данных, в которой женщин разделили на группы по возрасту и массе тела и посчитали усредненные показатели «двойного» и «тройного» теста.
Средний результат для каждого гормона (MoM) и стал основой для определения границы нормы. Так, если полученный результат при делении на MoM составляет 0.5-2.5 единиц, то уровень гормона считается нормальным. Если меньше 0.5 MoM — низким, выше 2,5 — высоким.
Какая степень риска хромосомных аномалий считается высокой?
В итоговом заключении риск по каждой патологии указывается в виде дроби.
Высоким считают риск 1:380 и выше.
Средним – 1:1000 и ниже – это нормальный показатель.
Очень низким считают риск 1:10000 и ниже.
Эта цифра означает, что из 10 тысяч беременных с таким уровнем, например, ХГЧ, только у одной родился ребенок с синдромом Дауна.
Если риск получился высоким, женщине рекомендуют пройти консультацию у генетика. Этот врач может назначить генетическое обследование, которое отличается высокой точностью.
Мнение специалиста
Риск 1:100 и выше является показанием для проведения диагностики хромосомной патологии плода, но меру критичности данных результатов каждая женщина определяет сама для себя. Кому-то вероятность 1:1000 может показаться критичной.
Точность биохимического скрининга беременных
Многие беременные с опаской и скепсисом относятся к биохимическому скринингу. И это неудивительно – этот тест не дает никакой точной информации, на его основании можно лишь предположить вероятность существования хромосомных нарушений.
Кроме того информативность биохимического скрининга может снижаться, если:
беременность произошла в результате ЭКО;
у будущей матери сахарный диабет;
беременность многоплодная;
будущая мать имеет лишний вес или его недостаток
Мнение специалиста
Как изолированное исследование, двойной и тройной тесты имеют малое прогностическое значение, при учете данных УЗИ достоверность возрастает до 60-70%, и лишь при проведении генетических анализов результат будет точным на 99%. Речь идет только о хромосомных нарушениях. Если мы говорим о врожденной патологии, не связанной с дефектами хромосом (например, «заячья губа» или врожденные пороки сердца и головного мозга), то здесь достоверный результат даст профессиональная ультразвуковая диагностика.
Генетические анализы при подозрении наличия хромосомных аномалий
На основании заключения УЗИ или при неблагоприятных результатах биохимического скрининга генетик может предложить будущей маме пройти инвазивное исследование. В зависимости от срока это может быть биопсия хориона или плаценты, амниоцентез или кордоцентез. Такое исследование дает высокоточные результаты, но в 0,5% случаев такое вмешательство может стать причиной выкидыша.
Забор материала для генетического исследования проводят под местной анестезией и при УЗИ-контроле. Тонкой иглой врач делает прокол матки и осторожно берет генетический материал. В зависимости от срока беременности это могут быть частицы ворсин хориона или плаценты (биопсия хориона или плаценты), амниотическая жидкость (амниоцентез) или кровь из пуповиной вены (кордоцентез).
Полученный генетический материал оправляют на анализ, который позволит определить или исключить наличие многих хромосомных аномалий: синдром Дауна, синдром Патау, синдром Эвардса, синдром Тернера (точность – 99%) и синдром Клайнфельтера (точность — 98%).
” Четыре года назад появилась альтернатива этому методу генетического исследования — неинвазивный пренатальный генетический тест. Это исследование не требует получения генетического материала – для него достаточно взять на анализ кровь из вены будущей мамы. В основе метода – анализ фрагментов ДНК плода, которые в процессе обновлении его клеток попадают в кровоток беременной.
Делать этот тест можно начиная с 10 недели беременности. Важно понимать, что этот тест пока мало распространен в России, его делают очень немногие клиники, и далеко не все врачи считаются с его результатами. Поэтому нужно быть готовыми к тому, что врач может настоятельно рекомендовать инвазивное обследование в случае высоких рисков по УЗИ или биохимическому скринингу. Как бы там ни было – решение всегда остается за будущими родителями.
В нашем городе неинвазивные пренатальные генетические тесты делают клиники:
«Авиценна». Тест Panorama. Неинвазивная пренатальная генетическая диагностика анеуплоидий 42 т.р. Неинвазивная пренатальная генетическая диагностика анеуплоидий и микроделеций — 52 т.р
«Алмита». Тест Panorama. Стоимость от 40 до 54 т.р. в зависимости от полноты исследования.
«УЗИ-студия». Тест Prenetix. Стоимость 38 т.р.
Мнение специалиста
Только хромосомный анализ может подтвердить или исключить хромосомную патологию. УЗИ и биохимический скрининг позволяют лишь рассчитать величину риска. Анализ на такие патологии как синдром Дауна, Эдвардса и Патау можно проводить с 10 недель беременности. Это делается посредством получения ДНК плода непосредственно из структур плодного яйца (прямой инвазивный метод). Риск, возникающий при инвазивном вмешательстве, при наличии прямых показаний гарантированно ниже опасности возникновения хромосомной патологии (примерно 0.2-0.5% по данным разных авторов).
Кроме того, сегодня любая беременная по собственному желанию может пройти обследование на наличие основных генетических заболеваний у плода прямым неинвазивным методом. Для этого достаточно лишь сдать кровь из вены. Метод является абсолютно безопасным для плода, но достаточно дорог, что и ограничивает его повсеместное применение.
Непростое решение
Вопрос о том нужна ли диагностика генетических заболеваний во время беременности и что делать с полученной в результате исследований информацией каждая женщина решает для себя сама. Важно понимать, что врачи не имеют права оказывать на беременную давления в этом вопросе.
Мнение специалиста
При сроке беременности до 12 недель женщина может сама определиться с вопросом о необходимости прерывания беременности в случае обнаружения какой-либо патологии плода. В более поздние сроки для этого нужны веские основания: патологические состояния, несовместимые с жизнью плода и заболевания, которые впоследствии приведут к глубокой инвалидизации или смерти новорожденного. В каждом конкретном случае этот вопрос решается с учетом срока беременности и прогнозом для жизни и здоровья плода и самой беременной.
Существуют два основания, по которым врачи могут рекомендовать прервать беременность:
выявлены пороки развития у плода, не совместимые с жизнью или с прогнозом глубокой инвалидизации ребенка;
состояние матери, при котором пролонгация беременности может вызвать неблагоприятное течение заболевания с угрозой для жизни матери.
Пренатальная диагностика – будь то биохимическое, ультразвуковое или генетическое исследование, не является обязательной. Некоторые родители хотят обладать максимально полной информацией, другие предпочитает ограничиваться минимальным набором обследований, доверяя природе. И каждый выбор достоин уважения.
28.03.2016
Полезная информация? оставь ссылку на статью в социальных сетях!
Я тоже сделала тест,но он не 40т стоит,а меньше!!!Жду результатов,очень страшно,но мы перестраховываемся.Сдавала кровь из вены.Люди рассказывают о проколах-это вообще жуть с топором.Надеюсь на хороший результат.Сдавала в клинике NGC,по рекомендации моей тети.Потом напишу ответ.
1806
(14/09/2016)
Добавлю, тестов разных несколько, в целом они одинаковые:
1. PANORAMA panoramatest.ru можно сдать в Алмите от 40тр, а можно заказать напрямую, от 35тр, присылают пробирки курьером, сдаешь кровь где угодно, курьер забирает пробирки, 14 календарных дней, пишут что бывает и быстрее, в Авицене тож сдают но подороже.
2. Дот-тест health.genoanalytica.ru/dot-test можно сдать в МОЙ ГЕН на Гоголя 15, 35тр, 10 дней
3. Prenetix можно сдать в uzistudio.ru 40тр
Topliner
Да, вы описали очень печальный вариант развития событий.
PlushFish, но, к сожалению, эта проверка при высоких рисках — по большому счету — возможна только с помощью инвазивных методов(( Получается, что результаты этого анализа мы получаем где-то на 13-15 неделе беременности. Если делать анализ крови на ХА (неинвазивные методы), то это еще 3-4 недели, при том, что его результаты тоже не 100% и не являются основанием — в случае плохого результата (не дай Бог никому) — для дальнейших действий. Т.е. в случае плохого результата придется делать диагностику инвазивным методом, а это еще в самом лучшем случае 2 недели.
Topliner
Я вас поняла, спасибо за мнение, опыт и информацию, с моей точки зрения она является очень ценной.
Хочу вместе с тем подчеркнуть, что основной посыл статьи в том, что как изолированное исследование биохимический скриннинг имеет небольшую ценность, то есть его результаты (в рамках определенного статистического порога) в любом случае требуют проверки.
PlushFish, вы неправильно меня понимаете. Чувства тут ни при чем, но статья на медицинскую тему должна соответствовать порядкам и стандартам. Высокий/низкий/средний риск — это прописанные стандарты и соответствующий алгоритм действий. А также вызывает у беременных женщин определенные негативные реакции. До того, как женщина с риском, например, 1:370, попадёт к генетику, она будет считать, что находится в группе высокого риска по ХА. Представляете, сколько это негативных переживаний? Лучше было бы указать, что существует несколько точек зрения. И с источниками указать варианты по рискам. От Вас я ничего не хочу, просто делюсь опытом на заданную тему: с оценкой рисков нужно быть осторожнее. За сим предлагаю закончить, все высказали свою точку зрения.
Topliner
В материале написано, что риски 1:380 являются основанием для консультации генетика, а не инвазивного вмешательства.
Мне жаль, если этот материал задел ваши чувства.
Тема действительно очень деликатная и этически сложная. Не вполне понимаю: что вы хотите от меня?
Извините, я не очень хорошо понимаю, что значит «относительно высокий».
Риск от 1:250 и до 1:1000 считается пограничным, средним. Классификация, которую применяет одно из авторитетнейших учреждений СФО: https://www.medgenetics.ru/medicine/shema_obsledovanija/.
И действительно, это основание для консультации генетика. К слову сказать, при риске 1:394 (то есть ниже значения 1:380) мне в свое время также была назначена консультация генетика.
Высокий риск — это основание для проведения инвазивной диагностики.
Спорить дальше не буду, в результатах анализов, которые выдает Медико-генетическая консультация (Станиславского, 24) сказано дословно: «Риск от 1:101 и ниже (1:102, 1:103 и т.д.) считается низким».
Для женщин, получающим этот анализ, очень важно разграничение высокий-пограничный (средний)-низкий. Я разбиралась в этом последние недели (для личных целей), и могу сказать, что вышеописанное подтвердили три генетика — главный генетик Новосибирска, главный генетик Новосибирской области, главный врач НИИ генетики Томск.
Для того, чтобы окончательно прояснить вопрос, который возник в ходе нашего обсуждения, я снова обратилась к нашим экспертам за консультацией:
-Верно ли, что риски по результатам биохимического скрининга беременных 1:380 — 1:250 — считаются относительно высокими и являются основанием для рекомендации консультации генетика?
Вопрос прокомментировал Мусохранов Николай Николаевич, директор Сети медицинских центров «УЗИ студия», врач УЗД:
«Да, конечно, именно так и есть — это основание для консультации генетика».
Еще раз спасибо за внимательное отношение к материалу.
Topliner
Ссылок по этому вопросу, в том числе с мнениями компетентных специалистов, очень много, я не знаю, какой из них вы сочтете репрезентативным. Моя позиция описана. Спасибо за внимание к ней!
PlushFish, скажите, пожалуйста, кто источник этих данных:
Высоким считают риск 1:380 и выше.
Topliner
Спасибо за уточнения. Вся информация о ценах получена непосредственно от клиник. Разумеется, нужно уточнять при обращении. О рисках вся информация указана. Меру критичности для себя определяет каждая женщина сама.
Статья полезная, но не очень точная.
1. Высоким считают риск не 1:380 и выше (по крайней мере по СД), а 1:100 и выше, в таком случае врачи будут настаивать на инвазивной диагностике. Пограничный — 1:250, тут будут предлагать, решение принимать женщине.
2. Цены на неинвазивную диагностику выше. Так, в УЗИ-студии это 38 000 + 1600 за транспортировку. В Авиценне от 45 тыс. рублей.
очень своевременная (для меня) информация. завтра первый скрининг в ЖК, еще хочу сделать дубль в частной клинике. т.к. с первой беременности не очень доверяю результатам ЖК — пять лет назад меня убеждали, что в 30 лет женщина не может быть здорова и нормально выносить беременность! чем только не пугали! чуть не прокесарили на 32 неделе по ошибке УЗИ проведенного в ЖК. Ну а теперь то уж и подавно в 35-36 лет это просто не реально! режим хрустальной вазы обязателен + запугивают генетикой (по всем источникам риски ростут после 35!). Предупрежден (проинформирован)- значит вооружен!
спасибо!
Источник