Анализ на антифосфолипидный синдром в инвитро

Определение 10 видов антител, направленных против фосфолипидов и их кофакторов, раздельно классов IgG и IgM (20 показателей, качественный формат) для использования в числе дополнительных обследований при диагностике АФС. 

Антифосфолипидный синдром (АФС) — аутоиммунное заболевание, которое характеризуется рецидивирующими тромбозами и/или привычным невынашиванием беременности, ассоциированными со стабильным присутствием антифосфолипидных антител. АФС может быть первичной патологией, либо наблюдаться на фоне другого основного заболевания, в частности, системной красной волчанки (имеет место у около 35% пациентов с СКВ). Это наиболее распространенный вид приобретенной тромбофилии, которая может стать причиной тромбоза и фактором риска невынашивания беременности или преждевременных родов на фоне тяжелой преэклампсии или плацентарной недостаточности. 

В основе диагностики этой патологии лежат классификационные критерии антифосфолипидного синдрома (международный консенсус, Сидней, 2006), которые позволяют поставить такой диагноз, если он подтвержден как минимум одним клиническим и одним лабораторным критерием. В число лабораторных критериев АФС включены 3 клинически наиболее значимых маркера: обнаружение значимых титров антител к кардиолипину или бета-2-гликопротеину 1 и выявление рекомендуемыми методами волчаночного антикоагулянта в функциональном фосфолипид-зависимом коагулологическом тесте. Эти исследования, относят к тестам первой линии при подозрении на АФС (см. комплекс тестов ОБС55 Антифосфолипидный синдром, лабораторные критерии). Однако, если результаты указанных тестов отрицательны, но остаются веские клинические подозрения на АФС, могут использоваться расширенные лабораторные исследования, включающие оценку наличия неклассических («некритериальных») аутоантител к фосфолипидам и их белковым кофакторам. 

Антифосфолипидные антитела при АФС реагируют преимущественно не с самими фосфолипидами, а с белок-фосфолипидными комплексами, которые образуются при связывании белков с отрицательно-заряженными фосфолипидами. К белковым кофакторам, играющим роль в формировании мишеней антифосфолипидных антител при АФС, относится прежде всего бета-2-гликопротеин 1, а также аннексин V и протромбин. В группу антифосфолипидных антител включают антититела к кардиолипину, фосфатидилхолину, фосфатидилэтаноламину, фосфатидилглицеролу, фосфатидилинозитолу, фосфатидилсерину и их белковым кофакторам, в том числе — бета-2-гликопротеину 1, аннексину V и протромбину, а также волчаночный антикоагулянт, выявляемый в коагулологическом тесте. Патогенные свойства таких аутоантител связывают с индукцией воспаления, нарушением функционирования тромбоцитов, эндотелия, трофобласта, плаценты и тромбогенным потенциалом. 

Предлагаемое комплексное исследование с использованием дот-иммуноанализа позволяет выявлять наличие антифосфолипидных антител, направленных против 7 разновидностей фосфолипидов и 3 основных белковых кофакторов фосфолипидов, раздельно по классам IgG и IgM – всего 20 видов серологической реактивности. Исследование такого спектра антител может давать дополнительную информацию для пациентов, негативных по основным лабораторным критериям АФС, а также для уточнения рисков у пациентов, позитивных по одному из лабораторных критериев. Выявление одновременной позитивности в серологических реакциях на разные антигены может указывать на больший риск развития тромбоза, невынашивания или патологии беременности. 

Само по себе выявление антифосфолипидных антител недостаточно специфично для диагностики АФС, они встречаются при других аутоиммунных, инфекционных и лимфопролиферативных заболеваниях. Появление таких антител при инфекциях имеет временный характер, в таких случаях антитела обычно отсутствуют при повторном определении через 3-6 месяцев.

Литература

1. Клинические рекомендации по лечению антифосфолипидного синдрома. Ассоциация ревматологов России. М., 2013. 
2. Корнюшина Е.А. с соавт. Профилактика потери беременности у женщин с циркуляцией аутоантител, не входящих в критерии антифосфоипидного синдрома. Журнал акушерства и женских болезней. 2018, том 67, вып. 5 с. 24-30. 
3. Лапин С.В. Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. СПб, «Человек», 2010.
4. Решетняк Т.М. Принципы диагностики и терапии антифосфолипидного синдрома. РМЖ, 2014, № 28, с. 2003-2011. 
5. Miyakis S., Lockshin M.D., Atsumi T. et al. International consensus statement on an update of the classification criteria for define antiphospholipid syndrome (APS). J Thromb Haemost. 2006. Vol. 4. Р. 295–306 
6. Nalli C, Somma V et al. Anti-phospholipid IgG antibodies detected by line immunoassay differentiate patients with anti-phospholipid syndrome and other autoimmune diseases. Auto Immun Highlights. 2018 May 29;9(1):6.  
7. Tektonidou MG, Andreoli L, Limper M, et al. EULAR recommendations for the management of antiphospholipid syndrome in adults. Ann Rheum Dis Epub ahead of print: 15 May 2019, doi:10.1136/annrheumdis-2019-215213 
8. The General Practice Guide to Autoimmune Diseases. Ed. by Shoenfeld Y., Meroni P.L. EASI. PABST, 2012. 331 p. 
9. Материалы фирмы — производителя реагентов.

Антитела к кардиолипину , IgG и IgM выявляют у 20-50% больных системной красной волчанкой и 3-20% больных другими системными ревматическими заболеваниями. Повторное невынашивание беременности и тромбозы нередко отмечают при системной красной волчанке. Клинические проявления антифосфолипидного синдрома (АФС) на фоне другого ревматического заболевания, сочетающиеся с характерными лабораторными признаками АФС, указывают на его «вторичный» генез. 

До 50% всех случаев АФС являются «вторичными». Вторичный АФС может выявляться при системной красной волчанке, ювенильном ревматоидном артрите, синдроме Шегрена, склеродермиии, полимиозите, реже при ревматоидном артрите. Основным специфическим лабораторным показателем для этой группы заболеваний является АНФ (антинуклеарный фактор, выявляемый с применением клеточной линии НЕр2, см. тест № 1267). С антикардиолипиновыми антителами его роднит общий механизм возникновения аутоантител, обусловленный иммунной реакцией на антигены апоптотических фрагментов клеток (нуклеарные антигены и фосфолипиды клеточных мембран в таких фрагментах могут становиться иммуногенными, что приводит к формированию аутоантител). Антитела к кардиолипину, фосфолипидам и их белковым кофакторам (в частности, бета-2-гликопротеину 1) вызывают нарушения системы свертывания крови и других физиологических процессов, что приводит к тромбозам и повторным выкидышам. Одновременное выявление антинуклеарного фактора на клеточной линии НЕр-2 и антител к кардиолипину позволяет установить как риск развития АФС у больных аутоиммунными заболеваниями, так и диагностировать аутоиммунные заболевания у больных с клиникой АФС. 

В связи с вовлеченностью антител к кардиолипину во множество патогенетических процессов, их выявление имеет большое значение при АФС и ассоциированных состояниях (см.показания). Кроме стимуляции протромботических механизмов, антикардиолипиновые антитела участвуют в индукции воспаления, нарушают функции эндотелия, нарушают функции трофобласта и плаценты, могут принимать участие в развитие атеросклероза. Выявление антител к кардиолипину указывает на высокий риск развития системной красной волчанки.

Увеличение содержания антител к кардиолипину, IgG или IgM является лабораторным критерием АФС, а также указывает на риск развития его симптомов. Риск тромбоза повышается с увеличением содержания антител. Выявление антител к кардиолипину, IgG и IgM должно рассматриваться в соответствии с действующими критериями антифосфолипидного синдрома 2006 года. Для иммунологического подтверждения АФС требуется подтверждение стабильного присутствия аутоантител, уровень антител должен был высоким, и эти значения должны сохраняться при повторном исследовании через 12 недель (см. таблицу критериев АФС и комментарии экспертов). 

Положительные результаты определения антител к кардиолипину могут иногда выявляться при инфекционных заболеваниях и изредка у клинически здоровых лиц. В большинстве подобных случаев появление антител в невысоком титре — это преходящий феномен, не ведущий к формированию нарушений в системе свертывания крови. 

Антинуклеарный фактор на НЕр-2 клеточной линии встречается при многих аутоиммунных заболеваниях, что позволяет использовать его в качестве универсального серологического показателя. С наибольшей частотой он выявляется при системной красной волчанке, ювенильном ревматоидном артрите, синдроме Шегрена, склеродермиии, полимиозите, реже при ревматоидном артрите.